Fluoresans mikwoskospi: prensip nan metòd la

Absòpsyon ak re-emisyon nan plis likid limyè inòganik ak òganik se rezilta nan fosforesans oswa fluoresans. Diferans ki genyen ant fenomèn nan se dire a nan entèval ki genyen ant absòpsyon ak emisyon nan règ limyè. Lè fluoresans nan pwosesis sa yo fè fèt prèske ansanm, pandan y ap fosforesans - ak kèk reta.

enfòmasyon istorik

Nan 1852, Britanik syantis Stokes, premye dekri fluoresans. Li entwodwi yon nouvo tèm kòm yon rezilta nan eksperyans yo ak fluorin, ki emèt limyè wouj anba limyè iltravyolèt. Stokes te note yon fenomèn ki enteresan. Li se te jwenn ke longèdonn nan radyasyon an fliyoresan se toujou pi gran pase koule nan limyè a eksitasyon.

Konfime ipotèz la nan 19yèm syèk la te gen anpil eksperyans. Yo te montre ke yon varyete de echantiyon fluoresce ki anba enfliyans a limyè iltravyolèt. Pami materyèl sa yo, pami lòt bagay, te kristal, rezin, mineral, klowofil, dwòg bit, konpoze inòganik, vitamin, lwil. Itilize nan dirèk nan koloran pou tès byolojik te kòmanse sèlman nan 1930

Fluoresans mikwoskospi: Deskripsyon

Gen kèk nan materyèl yo te itilize nan pwemye mwatye nan syans yo syèk 20yèm ekspoze segondè espesifik. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Mèsi a pèfòmans nan, ki pa t 'ka reyalize pa konparan metòd, te metòd la nan fluoresans mikwoskospi vin tounen yon zouti esansyèl nan rechèch yomedikal ak byolojik. Egal-ego rezilta enpòtan yo te jwenn, epi pou materyèl yo.

? Ki sa ki avantaj ki genyen fè metòd la nan fluoresans mikwoskospi? Lè l sèvi avèk materyèl nouvo te vin posib ak seleksyon an nan eleman trè espesifik selil submicroscopic. Fluoresans mikwoskospi kapab detekte molekil sèl. Yon varyete de koloran pèmèt idantifikasyon an nan atik miltip nan yon fwa. Malgre rezolisyon an limite espasyal nan limit la diffraction nan ekipman la, ki, nan vire, depann sou pwopriyete yo espesifik nan echantiyon an, idantifikasyon an nan molekil pi ba pase nivo sa a se tou byen posib. echantiyon Divès apre iradyasyon egzibisyon autofluorescence. Sa a se fenomèn lajman ki itilize nan petroloji, Botanik, endistri a semi-conducteurs.

karakteristik

Etidye tisi bèt oswa ajan patojèn souvan konplike oswa twò fèb oswa trè fò unspecific autofluorescence. Sepandan, valè a nan etid achte entwodiksyon an eleman yo materyèl eksite nan yon longèdonn espesifik ak émettant nesesè entansite a koule limyè. Fluorokrom aji kòm koloran kapab nan poukont tache ak estrikti (vizib oswa envizib). Se konsa yo gen yon selectif segondè nan sib la, ak sede a pwopòsyon.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. te fluoresans mikwoskospi te lajman itilize depi avènement de koloran natirèl ak sentetik. Yo posede sèten Des entansite nan emisyon an ak eksitasyon ak sible objektif byolojik espesifik.

Idantifikasyon nan molekil moun

Anpil fwa, nan kondisyon ideyal, ou kapab enskri yon lumineux eleman ki apa a. Pou sa, pami lòt bagay, li se nesesè yo bay yon bri ase ki ba nan detektè a ak background nan optik. Fluoreseinik molekil nan echèk akòz photobleaching ka emèt jiska 300 mil. Foton. Nan 20% efikasite koleksyon nan pwosesis la epi yo ka enskri yo nan yon kantite lajan nan apeprè 60 mil.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Fluoresans mikwoskospi ki baze sou fotodyod lavalas oswa miltiplikasyon elektwonik, pèmèt chèchè yo yo obsève konpòtman an nan molekil moun nan dezyèm lan, ak nan kèk ka menm minit.

konpleksite

Yon kestyon kle an favè repwesyon nan jan nou koumanse bri optik. Akòz lefèt ke anpil nan materyèl yo te itilize nan desen an nan filtè ak vè montre kèk autofluorescence, efò yo nan syantis nan premye etap yo byen bonè te oryante nan pwodiksyon an nan eleman gen yon fluoresans ki ba. Sepandan, eksperyans ki vin apre yo te mennen nan konklizyon nouvo. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. An patikilye, li te jwenn li ke fluoresans mikwoskospi, ki baze sou manm refleksyon entèn yo, li pèmèt yo reyalize yon background ki ba ak entansite wo eksitasyon limyè.

mekanis

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. prensip yo nan fluoresans mikwoskospi, ki baze sou manm refleksyon entèn se itilize nan vag evanesant oswa evanesant. Li fèt nan fwontyè ant medya ak diferan endis Refractive. Nan ka sa a, gwo bout bwa a limyè pase nan prism la. Li te gen yon wo Refractive paramèt endèks.

prism la adjasan a solisyon an akeuz oswa vè ak paramèt ki ba. Si yon gwo bout bwa nan limyè dirije nan li nan yon ang ki pi plis kritik, se gwo bout bwa a totalman reflete soti nan koòdone la. Fenomèn sa a, nan vire, lakòz vag nonpropagating. Nan lòt mo, ki te pwodwi jaden an elektwomayetik Penetration nan yon medyòm ak yon pi ba paramèt endèks Refractive nan yon distans mwens pase 200 nanomètr.

vag evanesant Entansite a nan limyè a ta dwe ase yo motive fluorofor. Men tou, paske nan pwofondè piti anpil li yo, volim li pral piti anpil. Rezilta a se yon jan nou koumanse ba-nivo.

modifikasyon

se fluoresans mikwoskospi ki baze sou manm refleksyon entèn yo, kapab aplike ak epi-lumières. Sa mande pou lantiy ak segondè Ouverture nimerik (omwen 1.4, men li se dezirab ke li te rive nan 1.45-1.6), ak ki pasyèlman eklere aparèy jaden. Se lèt la reyalize avèk yon gwosè plas ki piti yo. Pou pi gwo inifòmite lè l sèvi avèk yon bag mens, ki se ki te bloke pa yon pòsyon nan kouran an. Pou ang a kritik, apre yo fin ki gen yon refleksyon manm, nou bezwen yon wo nivo de refraksyon nan mwayen an imèsyon nan lantiy la ak kouvèti glas la nan mikwoskòp la.